Relatório de aula Prática 4:Fracionamento Celular

Fracionamento Celular

 Introdução

O fracionamento celular consiste na separação, por centrifugação, das estruturas sub-celulares, após rompimento das células.

Objetivo

Separar os componentes celulares através do fracionamento por centrifugação para o estudo da organização molecular e do funcionamento da célula.

Material e Métodos

02 a 03 folhas de Tradescantia purpúrea

01 almofariz (gral) e 01 pistilo

02 tubos de micro-centrifuga

Pipetas Pasteur ou conta-gotas

Centrifuga

Detergente de louça (liquido ou gel)

Água acidulada (02 a 03 gotas de vinagre – ou acido acético – em  mais ou menos 100 ml de água).

1-Colocou-se 3 ml de água acidulada em um almofariz (ou um pires ). A razão para usar água acidulada é porque o pigmento antocianina que iremos separar cloroplastos é rosa ou roxo em PH ácido, mas verde em PH alcalino. Como iríamos separar a antocianina da clorofila, que também é verde, ficaria difícil de notar a diferença dos dois pigmentos se por ventura a água da torneira for levemente alcalina.

2-Esmagou-se nessa solução 2 a 3 folhas de Tradescantia com um pistilo.

3-Transferiu-se com uma pipeta de Pasteur a parte liquido do homogeneizado para um tubo de micro-centrifuga e centrifugou rapidamente (15 seg) para retirar fibras de celulose e outros resíduos maiores;

4-Transferiu-se o sobrenadante para um novo tubo. Observou-se que o liquido tem cor marrom. Centrifugou por 5 minutos; pode-se ver claramente, após a centrifugação, que o sobrenadante é um liquido roxo, pela presença do pigmento hidrossolúvel antocianina. No fundo do tubo ficou um precipitado verde, pela presença dos cloroplastos, que são organelas grandes e por isso vão para o fundo do tubo.

5-Transferiu-se o sobrenadante para um novo tubo;

6-Com a pipeta Pasteur, ressuspendeu-se o precipitado (cloroplastos) em água acidulada.

7-Acrescentou-se uma gota de detergente no tubo contendo a solução “verde” e agitou o tubo por mais ou menos um minuto;

8-Centrifugou-se por cinco minutos os tubos com o sobrenadante (“solução roxa”) e com precipitado (“solução verde”).

Resultados e Discussão

Notou-se que os cloroplastos não precipitavam mais, uma vez que deixaram de existir, pois o detergente “desmanchou” as membranas daquela organela. O liquido do tubo ficou “todo verde”, porque ao destruir os cloroplastos o detergente “libera” a clorofila. Como esta é uma pequena molécula, a força centrifuga aplicada não consegue precipitá-la, como também não precipita antocianina, que também é uma molécula pequena.

Conclusão

Adicionou-se 18 ml de água em 1 gota de vinagre, utilizando uma proveta de 100 ml pegou-se 3 ml de água e pingou-se na planta Tradescantia,colocou-se a planta dentro de um recipiente, na qual foi amassada, triturada usando-se um pistilo, após a planta ser triturada ficou um liquido, que colocou-se em um tubo de micro-centrifuga e foi centrifugado, antes de ser colocado no tubo de micro-centrifuga o liquido tinha uma coloração verde-escuro, e após ser centrifugado ficou duas regiões no tubo; o pelliet e o sobre nadante, no pelliet ficou-se a parte densa, e na região sobre nadante ficou-se a parte liquida, que ficou-se com uma coloração vermelha. Com a proveta pegamos o sobre nadante e transferimos para um novo tubo.

Descartamos os resíduos que ficou na região mais densa do tubo, e pegamos o liquido que ficou na região sobre nadante e colocamos no mesmo tubo e centrifugamos novamente e ficou-se com a coloração roxa, ficou com a cor roxa por causa da presença do pigmento antocianina (que fica na região sobre nadante do tubo) e na região mais densa do tubo ficaram os cloroplastos.

Depois retirou o sobrenadante e colocou-se água acidulada e centrifugou novamente. Colocou logo após o detergente e centrifugou-se, notamos que o detergente degradou os restos de cloroplastos e eslusou os restos das membranas.

Referências Bibliográficas

 LACERDA, Guilherme Araújo

2013 Manual de aulas práticas em Bioquímica... / GuilhermeAraújo Lacerda. – Montes Claros : UNIMONTES,